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　　醫(yī)用清洗劑蛋白酶活力，是表征產(chǎn)品中蛋白酶活性強(qiáng)度的關(guān)鍵參數(shù)，決定了其在規(guī)定條件下分解醫(yī)療器械表面蛋白類污染物的能力。醫(yī)用清洗劑蛋白酶活力檢測是企業(yè)落實(shí)產(chǎn)品質(zhì)量責(zé)任的重要舉措，不僅能確保產(chǎn)品符合YY/T0734等行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)要求，還能通過精準(zhǔn)把控酶活力保障清洗效果一致性，降低因產(chǎn)品不合格面臨的市場監(jiān)管風(fēng)險(xiǎn)與品牌信譽(yù)損失。

　　蛋白酶活力是含酶醫(yī)用清洗劑的核心性能指標(biāo)，T/WSJD002-2019《醫(yī)用清洗劑衛(wèi)生要求》針對(duì)蛋白酶活力檢測制定了標(biāo)準(zhǔn)化操作步驟與明確的結(jié)果判定準(zhǔn)則，是檢測工作的核心依據(jù)。

　　醫(yī)用清洗劑蛋白酶活力檢測步驟

　　步驟1：檢測前準(zhǔn)備

　　試劑配制：按標(biāo)準(zhǔn)要求配制磷酸緩沖液（pH=6.0）、偶氮酪蛋白底物液、三氯乙酸（TCA）終止液，所有試劑配制完成后需驗(yàn)證性能，如緩沖液pH值校準(zhǔn)。

　　儀器調(diào)試：將恒溫水浴鍋調(diào)至37℃±0.2℃，分光光度計(jì)預(yù)熱30分鐘并校準(zhǔn)波長至440nm，移液管、容量瓶等器具提前清洗、干燥、校準(zhǔn)。

　　樣品準(zhǔn)備：隨機(jī)抽取待檢測醫(yī)用清洗劑，液體樣品搖勻后取樣，固體樣品研磨成粉末后取樣，確保樣品具有代表性。

　　步驟2：樣品稀釋與過濾

　　取1.00mL待測樣品，用已校準(zhǔn)的磷酸緩沖液定容至合適體積，稀釋原則為使酶活力處于3.7U/mL～5.6U/mL的標(biāo)準(zhǔn)檢測范圍，具體稀釋倍數(shù)根據(jù)產(chǎn)品標(biāo)注酶活力估算。

　　將稀釋后的樣品通過四層無菌紗布過濾，去除樣品中的不溶性雜質(zhì)，濾液收集于潔凈試管中，做好標(biāo)記，濾液需在30分鐘內(nèi)使用。

　　步驟3：恒溫酶促反應(yīng)

　　取2支潔凈試管，分別標(biāo)注“樣品管”與“空白管”。

　　樣品管：加入1mL待測濾液+2mL偶氮酪蛋白底物液，輕輕搖勻后立即放入37℃恒溫水浴鍋，精準(zhǔn)計(jì)時(shí)10分鐘。

　　空白管：加入1mL待測濾液+2mL磷酸緩沖液，輕輕搖勻后同樣放入37℃恒溫水浴鍋，與樣品管同步計(jì)時(shí)。

　　步驟4：反應(yīng)終止與沉淀

　　樣品管反應(yīng)滿10分鐘后，立即取出，加入2mLTCA終止液，搖勻后靜置10分鐘，使未被分解的蛋白質(zhì)完全沉淀。

　　空白管在與樣品管相同的時(shí)間點(diǎn)取出，加入2mLTCA終止液，再加入2mL偶氮酪蛋白底物液，搖勻后靜置10分鐘，此操作是為了消除樣品本身對(duì)吸光度的干擾。

　　步驟5：過濾與吸光度測定

　　將樣品管與空白管中的液體分別用定性濾紙過濾，收集濾液于潔凈比色皿中。

　　以空白管濾液為參比，在分光光度計(jì)440nm波長下，測定樣品管濾液的吸光度值（A），測定時(shí)比色皿需擦拭干凈，避免劃痕影響讀數(shù)，每個(gè)樣品測定3次，取平均值。

　　步驟6：酶活力計(jì)算

　　根據(jù)測得的吸光度平均值，查閱T/WSJD002-2019表B.1《吸光與酶濃度對(duì)照表》，換算出樣品的酶濃度（c，U/mL）。

　　結(jié)合樣品稀釋倍數(shù)，計(jì)算出原始樣品的蛋白酶活力，公式為：原始酶活力（U/mL）=換算酶濃度×稀釋倍數(shù)；固體樣品則換算為U/g，計(jì)算結(jié)果保留4位有效數(shù)字。

　　醫(yī)用清洗劑蛋白酶活力檢測結(jié)果判定準(zhǔn)則

　　T/WSJD002-2019從酶活力實(shí)測值、穩(wěn)定性、產(chǎn)品標(biāo)注符合性三個(gè)維度，制定了蛋白酶活力檢測結(jié)果的判定標(biāo)準(zhǔn)，判定結(jié)果分為“合格”與“不合格”兩類，具體準(zhǔn)則如下：

　?。?）合格判定標(biāo)準(zhǔn)

　　實(shí)測值與標(biāo)注值符合性：蛋白酶活力實(shí)測值≥產(chǎn)品標(biāo)注值的80%，這是對(duì)產(chǎn)品標(biāo)稱性能的核心驗(yàn)證要求。

　　有效期內(nèi)穩(wěn)定性：若檢測的是有效期內(nèi)的樣品，結(jié)合產(chǎn)品出廠時(shí)的酶活力檢測數(shù)據(jù)，計(jì)算得出的酶活力下降率≤20%。

　　平行樣偏差要求：同一樣品的平行樣檢測結(jié)果相對(duì)偏差≤5%，確保檢測結(jié)果的重復(fù)性。

　?。?）不合格判定標(biāo)準(zhǔn)

　　出現(xiàn)以下任一情況，即可判定樣品蛋白酶活力檢測不合格：

　　蛋白酶活力實(shí)測值＜產(chǎn)品標(biāo)注值的80%；

　　有效期內(nèi)樣品的酶活力下降率＞20%；

　　平行樣檢測結(jié)果相對(duì)偏差＞5%，且重新檢測后仍無法達(dá)標(biāo)；

　　檢測過程中發(fā)現(xiàn)樣品存在變質(zhì)、污染，或試劑、儀器不符合標(biāo)準(zhǔn)要求，且無法排除對(duì)結(jié)果的影響。