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　　牙膏抑制牙菌斑功效體外試驗(yàn)，是指脫離人體口腔的真實(shí)環(huán)境，在實(shí)驗(yàn)室可控條件下，模擬牙菌斑形成的相關(guān)場景，通過檢測牙膏或其提取物對牙菌斑優(yōu)勢致病菌的生長、代謝，以及牙菌斑生物膜的形成、成熟過程的抑制作用，來評估牙膏抑菌活性的一類試驗(yàn)方法。

　　牙膏抑制牙菌斑功效評價檢測中的體外試驗(yàn)不涉及人體受試者，核心目的是快速篩選牙膏配方、驗(yàn)證抗菌成分的作用靶點(diǎn)、明確抑菌的初步機(jī)制，為后續(xù)的體內(nèi)臨床試驗(yàn)（人體口腔試驗(yàn)）提供依據(jù)，減少體內(nèi)試驗(yàn)的盲目性和成本。

　　牙膏抑制牙菌斑功效體外試驗(yàn)方法流程

　　1.細(xì)菌生長抑制試驗(yàn)

　　此方法用于檢測牙膏對游離態(tài)牙菌斑致病菌的直接殺滅或生長抑制能力，常用肉湯稀釋法和平板涂布法。

　　肉湯稀釋法流程

　　在無菌96孔板中，加入定量的液體培養(yǎng)基和不同濃度梯度的牙膏混懸液。

　　接入對數(shù)生長期的試驗(yàn)菌液，使體系中細(xì)菌濃度達(dá)到10?~10?CFU/mL。

　　將96孔板置于37℃恒溫培養(yǎng)箱中，厭氧培養(yǎng)18~24小時（模擬口腔厭氧環(huán)境）。

　　培養(yǎng)結(jié)束后，用酶標(biāo)儀檢測各孔的吸光度（OD值），OD值越低，說明細(xì)菌生長抑制效果越好；同時計算最低抑菌濃度（MIC）——即能完全抑制細(xì)菌生長的最低牙膏濃度。

　　平板涂布法流程

　　制備含不同濃度牙膏混懸液的固體培養(yǎng)基平板，同時設(shè)置空白培養(yǎng)基平板作為對照。

　　取定量菌液均勻涂布在平板表面，厭氧培養(yǎng)18~24小時。

　　培養(yǎng)后觀察平板上的菌落數(shù)，計算菌落形成單位（CFU），通過與對照組對比，得出不同濃度牙膏的細(xì)菌抑制率。

　　2.牙菌斑生物膜抑制試驗(yàn)

　　牙菌斑在牙面以生物膜形式存在，此方法更貼近實(shí)際情況，常用羥基磷灰石片模型。

　　將羥基磷灰石（HA）片消毒后，放入含有液體培養(yǎng)基和菌液的培養(yǎng)皿中，37℃厭氧培養(yǎng)24小時，使細(xì)菌在HA片表面形成初始生物膜。

　　移除原有培養(yǎng)基，加入含不同濃度牙膏混懸液的新鮮培養(yǎng)基，繼續(xù)厭氧培養(yǎng)24~48小時。

　　培養(yǎng)結(jié)束后，取出HA片，用PBS輕輕沖洗去除未黏附的細(xì)菌。

　　指標(biāo)檢測

　　活菌計數(shù)：將HA片上的生物膜超聲洗脫，稀釋后涂布平板，計算CFU，評估牙膏對生物膜內(nèi)活菌的抑制效果。

　　生物膜形態(tài)觀察：通過掃描電子顯微鏡（SEM）觀察HA片表面生物膜的結(jié)構(gòu)，對比對照組，判斷牙膏是否能破壞生物膜的完整性。

　　生物膜代謝產(chǎn)物檢測：檢測生物膜代謝產(chǎn)生的有機(jī)酸（如乳酸）含量，有機(jī)酸減少量可反映牙膏對細(xì)菌代謝的抑制作用。

　　3.酶活性抑制試驗(yàn)

　　牙菌斑細(xì)菌會分泌葡糖基轉(zhuǎn)移酶（GTF）等酶類，促進(jìn)蔗糖轉(zhuǎn)化為葡聚糖，進(jìn)而加速生物膜形成。此方法用于檢測牙膏對相關(guān)酶活性的抑制作用。

　　提取或制備目標(biāo)酶液（如葡糖基轉(zhuǎn)移酶）。

　　將酶液與不同濃度的牙膏混懸液混合，加入底物（如蔗糖），在適宜溫度（37℃）下反應(yīng)一定時間。

　　通過試劑盒或分光光度法檢測反應(yīng)體系中酶促反應(yīng)產(chǎn)物的生成量，計算酶活性抑制率，判斷牙膏是否通過抑制關(guān)鍵酶活性來阻礙牙菌斑形成。

　　牙膏抑制牙菌斑功效評價檢測機(jī)構(gòu)-中科檢測，具備CMA/CNAS資質(zhì)認(rèn)證，開展牙膏功效評價檢測服務(wù)，具體檢測報告費(fèi)用及周期可以咨詢中科檢測工程師了解。